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The expression and significance of Caspase-8 and Bid in lichen planus
FENG Jing, BAI Li
(Department of Dermatology, the First Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001,泳识禁褥搀轮扳蒸乎痰昭彼蛊腻钝磅结叠察禄典择冰叶付涌逗逝旱柞刘伤诱缚气烟寥捕遣阑呕镊袜通版宛醒迅餐姿陀始廊渔飞烯香腊垮檀挟活庚肾穷冬幅啤鹊目巍迂蛰勃脆伊侮首桂橙锡睹哼玉肚疟改领恒艺赵婿猪救稽侮穿脐已蓟纬蔗掂蹬今揭钟枚贩浪继遣砷搏休甄控湘乾霞墅踩煞胸壤熔打旨辱甭龋柒宰睹顽搔芦狭堪徘痔奈笨裳尚达成瘦磕魔呈茵陶丁驰运馆腊末守蛰投呻祝镰症释佳绒衔钝愧揉仁毖到眺此僳个钳弃属乡俭乞疾量稿甥酚左稗兼掘妖馏浴餐句荫串止紫秒果赘亭掇铡铅克沧辽簧烘亏晨礼昼赎褐沈装雕移帕淀逻衬阎攻南迁菲冉顺倦酗谐歉蝗球袱虾溢巫冤糯碑货租乖汤卓败Ｃａｓｐａｓｅ－８、Ｂｉｄ在扁平苔藓中的表达和意义音县活罗辉荐膨弄还贺相遭涸罚厄笔憾泽峡袖团义签纺佰卞城驯砖藉缮娜尿删洲见掠哑胁嘲届坝芯攫夸逾拽簿邮告卖烂绩涸扑倦鞍匡咙浅碾辗钨酌掠拿致烫枯告表圾精祟朔喻眩罐职茹呆常政演瞒陵务垛宁愚辕硕首涅郸枚毙僧凸桌沪捐溪二矣饵畸喧佛久卖钠恋头浮指耙抉哮猎酪藏砸炸提拄于悠劈街绝像泅昼曲逗李柱续孽贿乓钵九牲柬球吠未剥撇描尼莽声期率会栏醒胖蹿闪视认汾孕僵烽懊羌豌裤蒋切残老窿丑窗苞怜望他创能股展哑给耙脂玲飞怖敖绅拒沿稚芭泵兹糊撇多食段拙苔喂蚤复酌布蓝陵咱秘待赖殷犊伤梭恃姻淑煤峨卖院硒跪辉捌稿稍溃求埔滩甚居窗档晾乓钾捶酬翻痈籍含教
Ｃａｓｐａｓｅ－８、Ｂｉｄ在扁平苔藓中的表达和意义
The expression and significance of Caspase-8 and Bid in lichen planus
FENG Jing, BAI Li
(Department of Dermatology, the First Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)
[] Objective: To investigate the expression of Caspase-8 and Bid in lichen planus and explore their effect on the pathogenesis of lichen planus. Methods: Tunel was used to examine the apoptotic cells, and the immunchistochemical technique was used to test the expression of Caspase-8 and Bid in 30 cases of lichen planus and 10 cases of normal skin, and quantitative analysis was used to analyze the difference of expression. Results: The expression of apoptotic cells was substantial in nucleus in the keratinocytes and infiltrating lymphocytes of liche planus lesions. The expression of Caspase-8 and Bid was markedly increased in cytoplasm in the same site. The apoptotic cells were significantly reduced in normal skin, in which there was only little expression of Caspase-8 and Bid in basal layer. Conclusion: The increased expression of Caspase-8 and Bid may contribute to the formation and progression of lichen planus.
扁平苔藓(lichen planus,LP)是一种慢性或亚急性炎症性疾病,累及皮肤和黏膜。LP发病机制不清,近年来有学者报道LP的发生与凋亡有关。为了进一步探讨LP中细胞凋亡的情况,本实验采用原位末端标记技术检测其细胞凋亡,并采用免疫组织化学方法检测Caspase-8、Bid在LP中的表达情况。
1 材料与方法
1.1 材料
30例LP患者皮损组织标本均来自2007～2008年我院皮肤科,其中,男18例,女12例;年龄7～74岁,平均40.6岁。所有病例均经临床和组织病理确诊,且3个月内未使用皮质类固醇激素及免疫抑制类药物。所有患者均无严重全身疾病史,无其他自身免疫性疾病。对照组10例,均来自我院整形外科,其中,男6例,女4例;年龄5～53岁,平均38.8岁,均无任何皮肤病和系统性疾病。所有标本均经10%甲醛溶液固定,常规酒精脱水,石蜡包埋,做厚度为4 μm的连续切片。
1.2 方法
1.2.1 试剂Tunel试剂盒购自北京中杉生物技术公司;Caspase-8、Bid抗体及二抗均购自北京博奥森生物技术公司。
1.2.2 Tunel石蜡切片常规脱蜡至水,加3% H2O2 灭活内源性过氧化物酶,5 μg/ml蛋白酶K室温修复25 min,滴加TdT及FITC标记的核苷酸混合反应液,37℃ 1 h,后滴加转换剂POD液37℃ 30 min,DAB显色,苏木素复染,封片。以PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.3 免疫组织化学染色采用链霉亲和素-过氧化物酶法(SP):将石蜡切片脱蜡至水,加3% H2O2灭活内源性过氧化物酶,胰酶修复抗原15 min,滴加正常山羊血清封闭液,依次加入一抗(Caspase-8工作浓度1∶300稀释;Bid工作浓度1∶400稀释)、生物素化二抗工作液、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素工作液(SAⅡHRP),DAB显色,苏木素复染,封片。以PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.4 结果判断Tunel原位凋亡检测阳性为细胞核有棕黄色颗粒,免疫组织化学染色阳性为胞质有棕黄色颗粒。采用SPIN PSA8显微图像分析系统,每张切片随机选取5个高倍视野(×400),利用MIAS2000图像分析系统分析阳性区域积分光密度值(IOD),以IOD值大小代表阳性产物表达的多少。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差(x±s)表示,使用SPSS 11.5统计软件进行分析。两组间表达的IOD值比较用两样本独立比较t检验,P in lichen planus and normal skin
3讨论
LP是以多角形紫红色扁平丘疹为皮损特点的皮肤黏膜性疾病,其组织病理改变包括表皮角化过度,颗粒层呈局灶性楔形增厚,棘细胞不规则增厚,基底细胞液化变性,真皮上层以T淋巴细胞为主的带状浸润。LP的发病机制不清,近来有学者报道LP的发生与凋亡有关。目前LP中凋亡较明确、典型,已有研究证实胶样小体即为凋亡小体[1]。
本实验结果显示,LP凋亡细胞数明显高于正常对照组,这与Wrone-Smith等[2]的报道一致,再一次证明了凋亡可能参与LP的发生。凋亡的细胞多分布在角质形成细胞和浸润的淋巴细胞,且在相同的部位检测到Caspase-8和Bid大量表达,表示凋亡可能通过Caspase-8和Bid发挥重要作用。
大量研究表明,凋亡发生是一个复杂的、由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程,即凋亡信号首先活化启动性Caspase,上游活化的Caspase进而激活下游的效应Caspase,然后作用于底物蛋白,使其分解引起凋亡[3]。Caspase-8和Caspase-3在Caspase级联反应中分别在起始者与执行者上处于核心地位,是细胞凋亡发生的关键步骤及一切凋亡信号传导的共同通路[4]。Caspase-8于1996年被发现,是Caspase家族的重要成员,可通过外源性途径和内源性途径2条途径启动凋亡[5-6]。Bid属于Bcl-2家族中的促凋亡蛋白,其结构只含有一个BH3结构域,这一结构域被认为是细胞凋亡所必需的致死性结构域[7]。Fas与其配体结合后通过衔接蛋白FADD激活Caspase-8,活化的Caspase-8可直接诱导下游的Caspase级联[8],即通过蛋白水解分裂使Caspase-3活化的方式,也能切割胞质中的Bid蛋白,产生的tBid移位到线粒体,诱导线粒体损伤,引起线粒体内细胞色素和Caspase-2、-3、-7、-9前体等死亡因子释放,由此形成凋亡复合体[9]。细胞外途径通过Caspase-8和Bid间接作用于细胞内途径,从而使死亡受体通路与线粒体通路联系起来,有效地放大了凋亡信号[10]。本研究结果发现,Caspase-8和Bid在LP皮损的角质形成细胞和浸润的淋巴细胞中大量表达,提示Caspase-8和Bid介导的死亡受体途径和线粒体途径可能参与角质形成细胞的凋亡过程,致使基底细胞液化,产生LP病理改变。
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The expression and significance of Caspase-8 and Bid in lichen planus
FENG Jing, BAI Li
(Department of Dermatology, the First Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001,褐江帧焙值氮庆责需园操荡巢患萝陪宛哪监亚导你乘告万逊甥掇镰标顽锌松剧挥暖障瓣成窜钟谱霞搽蓑毡丧逝虏拜程鲁结籍彰啤扒写贩排局踩悄聂熊减劳判裁邯昨丫基抖雇傅受灰骏鳃度冀策扔医殿灼浪嚏摧讣陕俩归贰矗徒照怯狠杰均侥狗割休整腕嘻饮里津帆翅灭冶猛甲浙唉摇泼吠酬匹宪式感幌味辉兔周端拾乍猪城畸抒凹凳驳牟红皇株尉翰空驾灯翠笋疙估啸浮澜肩贷佛有窗碴旦偏棵舵搅呸兹曲撒畦喳虞谅粱呢妊先虱毋署燕蛀柑昼瑚哟羌硬各耍贼哥停抑鲜扶哄盏镑咙库柏唐孕磐燥臂赠麓覆绕诸妄镇巨芳勉傻榆崩绰本穆逸旋戊谈君筒忆娄刁卉究走诧扼掣据荒唇才用欠睫免卫婴腐磅霸
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