（完整版）细胞生物学实验测试题

细胞生物学实验测试题

1、 试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作）

原理：荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。

（滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯）

用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

2、 试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。

原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如下：

β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43-

PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓

Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色)

主要步骤：

1、 前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝）

2、 制片：

（1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。

（2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。

（3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。 （洗去固定液）

（4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。

（5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子）

（6）、1%硫化铵处理（3-5min）;

（7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来）

（8）、制片观察。

结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。

对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活性，做好标记，其他步骤相同。

3、 试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。

原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，并使脱氧核糖的醛基游离出来，醛基化合物与Schiff试剂（无色品红溶液）结合，形成含醌基的紫红色化合物，使细胞内含DNA的部位呈紫红色，由呈现紫红色的部位即可推断DNA的存在，为提高实验的可信度，应设置对照实验，即将对照组先用热三氯乙酸处理，以除去细胞中的DNA。

4、 固定液的作用是什么？说出我们实验中所用过的几种不同的固定液及它们的实用范围。

作用：1、破坏细胞的酶系统，防止细胞自溶；

2、稳定细胞物质成分；

3、稳定各种细胞结构的空间构型；

总的来说，杀死并固定细胞。

⑵我们实验中用到的固定液

动物肝细胞线粒体的分离与观察 固定液 甲醇：冰醋酸=9：1

细胞中酸性磷酸酶的定位 固定液 10%福尔马林

植物细胞骨架的光学显微镜观察 固定液 3%戊二醛

DNA的Feulgen染色法 Carony固定液

简单固定剂即单一固定剂，常有的有乙醇，甲醛，冰醋酸等。乙醇只能凝固清蛋白，而冰醋酸只能凝固核蛋白，甲醛对这两种蛋白都不凝固。

简单固定剂的局限性大，如将其适当混合，制成复合固定剂可以取得更好的效果。常有的混合固定剂有Carony改良液（3份无水乙醇+1份冰醋酸），Bouin液等

5、 常用的组织破碎方法有哪些？各自的适用范围如何？

1.机械法 主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法，常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。

1)组织捣碎机、匀浆器：一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，匀浆器破碎细胞的程度比组织捣碎机高。

2)研钵: 多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。

2．物理法 主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。

1)反复冻溶法:多用于动物性材料。

2)急热骤冷法:用于细菌及病毒材料。

3)超声波处理:多用于微生物材料。

3．化学及生物化学法

1)自溶法: 在一定PH和适当的温度下，利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法。

2)酶溶法: 利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、半纤维素酶、脂酶等，将细胞壁分解，使细胞内含物释放出来。

3)表面活性剂处理: 如十二烷基硫酸钠。

6、 什么是差速离心法、密度梯度离心法？各自的用途如何。

差速离心法：是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。用途：此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离，采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。

密度梯度离心法：用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞悬液或者匀浆置于介质的顶部，通过重力或者离心力场的作用，使细胞分层分离。 用途： 可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。

7、 染色法有哪些方式？各自如何进行？

蛋白电泳常用的染色方法主要是考马斯亮蓝法，银染法，荧光染色法和负染法。用适当浓度的TritonX-100处理细胞，再经戊二醛固定和蛋白质染料考马斯亮蓝R250染色，即可观察细胞骨架结构。

吉姆萨（Giemsa）染色法：将细胞染色，使细胞器的轮廓显示出来，便于观察。

染色体染色法：醋酸洋红溶液或龙胆紫溶液

先用95%的酒精解离，再用水漂洗10min,然后用上述溶液染色3~5min。

苏木精 — 伊红染色法：苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

8、 显示染色体的实验，其材料往往需要作什么预处理？取材部位如何选择？

答：预处理：适宜浓度的秋水仙素。取材：生长旺盛或具有高度分裂能力的部位。

9、 试述用考马斯亮蓝R250来显示细胞微丝骨架的原理及其应注意的事项。

原理：细胞骨架是由蛋白纤维组成的复杂网状结构，可分为微管、微丝和中间纤维。用适当浓度的tritonx-100处理细胞，可将细胞质膜中和细胞之中的蛋白质和全部脂质抽提，单细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝r250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。

注意事项：1洋葱内表皮细胞在进行处理前必须在ph6.8的磷酸缓冲液中下沉。2固定，染色时间必须足够

10、 试述细胞类坏死处理的原理和死活细胞鉴别的方法。

原理：类坏死细胞是细胞介于生活和死亡之间的临界状态。引起类坏死的方法多种多样 如高温、冷冻、紫外线照射、酸碱处理等。类坏死和死亡之间的区别在于前者发生的变化是可逆的 而后者是不可逆的。

鉴定方法：

1、 依据细胞膜的通透性差异，可用化学染色法鉴定死活细胞，

2、 依据细胞代谢的差异

可用荧光染色法鉴定以及亚甲基蓝法鉴别酵母细胞的死活。

3、 质壁分离法可鉴别植物细胞的死活；

11、 如何进行线粒体的分离和鉴定（并说明原理）？

分离线粒体，可将组织匀浆液悬浮在悬浮介质中进行差速离心。在一定的离心场中，大小不一的颗粒沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在一个均匀悬浮介质中离心一定时间，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其他更轻的细胞器和大分子可依次再分离。

线粒体的鉴定可用詹纳斯绿活染法，由于线粒体中细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色，而周围的细胞质中的染料被还原成无色，从而鉴定。

12、 在分离出线粒体后，若要对其进行深入研究，技术路线如何？

答：将提取的线粒体制成悬浊液，滴一滴放在载玻片上，然后用詹姆斯绿B染色20到30分钟后，在显微镜下观察即可。

13、 在使用高速离心机时，要注意哪些问题？

1.放置离心管的时候一定要对称的放置，同时保持重量相当。

2.在开启离心机的时候一定要将离心机的盖子盖实。

3.开启和关闭离心机应该让速度缓慢增速或减速启动。

4.如果是有毒试剂还要做好通风处理。

14、 在分离叶绿体时发现分离出来的叶绿体很小，如何验证是否是由于该材料的叶绿体本来就小还是由于在分离时破碎造成的？

答：将所获得的叶绿体悬液小心加到做好的percoll梯度上，10500g，4℃离心10min，如果条带位于较上方的梯度，则为破碎的叶绿体，如果条带接近于梯度底部，则为完整叶绿体，叶绿体本身较小。

15、 在叶绿体分离出来后进行荧光观察，能清楚的观察到吗？

可以,有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿索的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。

16、 叙述“细胞膜的渗透性”实验的原理、主要步骤和应注意的问题。

原理：细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，此即细胞膜的选择通透性。

当红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到溶液中，使溶液由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。发生溶血现象所需时间长短，可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。

脂溶性物质如甘油等分子容易透过细胞膜，当这些分子进入红细胞时，会使细胞内的渗透压增加，细胞吸水膨胀，细胞膜破裂发生溶血。

主要步骤：

1、 血红细胞悬液制备：取兔血2-3ml，加入85%生理盐水4ml,在1000转每分离心5min,取50ml烧杯，将上述离心的红细胞用等渗溶液进行适当稀释；

2、 用注射器取10ml稀释过的细胞悬液备用；

3、 取试管架，10支洗干净的试管，分别标号；

4、 分别一一取10支试管，依次加入Nacl溶液，丙酮、乙醇、Na2SO4,甘油、硝酸钠、葡萄糖溶液、NH4CL溶液、草酸铵溶液、乙酸铵溶液等量；

5、 再取上述试管，每支试管分别加入1ml兔血，计时，看其能否发生溶血，若溶血，记录所需时间；

6、 取几种能够发生溶血的试管中的溶液放入离心管中，3000转每分离心5分钟后，取上层细胞悬液制成装片观察。

注意问题：

1.离心机使用时，要将配平后的离心管对称放置。

2. 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。

3.溶血较快的试管，用显微镜观察时要注意滴加血液后立即镜检，否则会看不到实验结果。

17、 进行细胞内的物质或结构原位显示的方法有哪些？各有什么特点。

细胞化学活体染色的方法、荧光标记免疫抗体的方法

细胞化学活体染色的方法特点：活体染色是利用某些无毒或毒性很小的染料来显示细胞内某些天然结构，而不影响细胞的生命活动或产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

荧光标记免疫抗体的方法特点：荧光抗体标记是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合， 形成荧光素-结合蛋白质化合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。

18、 如何进行马铃薯块茎细胞及其淀粉粒的制片与观察？

用刀片切取马铃薯块茎薄皮，放在盛有生理盐水的培养皿中，37℃下浴浮。然后捞出置于载玻片中央，滴加生理盐水，制备两张装片，其中一张滴加KI溶液染色，两张对比，镜检。染色的装片可见有许多蓝色的球形或椭球形的颗粒，即为淀粉粒。未染色的装片也可看到球形或椭球形的透明颗粒，即淀粉粒。

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